周鹤峰1 ,邵　敏2 ,葛正龙2(1. 遵义医学院珠海校区生物工程教研室,广东珠海　519041; 2. 遵义医学院生物化学教研室,贵州遵义　563003)[摘　要] 　目的　对碱裂解法提取质粒DNA中主要试剂的作用进行研究。方法　采用不同的溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ分别进行质粒DNA的提取。结果　方法3得到质粒DNA的量明显偏少,方法4得到的质粒DNA含蛋白质较多。结论　溶液Ⅰ对实验结果影响不大,溶液Ⅱ中的NaOH关系到所提取质...

实验目的和要求 学习和掌握限制性内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电泳的操作方法，并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具，琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定DNA片段的有效方法。

12.1 DNA核苷酸序列的确定 12.2 重组 DNA 技术 12.3 PCR技术 12.4 转基因技术 12.5 基因治疗技术

Mentor: Zhaoqian LiuStudent: Qiong Huang

外源DNA片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化，则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的5'磷酸和 3'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的DNA连接酶催化，这两种酶就是大肠杆菌DN...

第一部分 动物组织和细胞中DNA和RNA 的提取第二部分 核酸含量测定(一)紫外分光光度法(二)二苯胺法测定DNA含量（三）地衣酚显色法测定RNA 含量（四）定磷法测定核酸的含量

目的： 采用碱变性法，学习小规模制备质粒DNA的技术 原理： 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体...

在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob 基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。 转化(Transformation)是将外源DNA 分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本...

Sanger双脱氧链终止法Maxam－Gilbert DNA化学降解法

近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突变和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表达和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。 医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡...

把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的复制...

第一节 概述第二节 从植物组织提取基因组DNA第三节 从动物组织提取基因组DNA第四节 细菌基因组DNA 的制备第五节 基因组DNA的检测

一.提纯质粒DNA的方法（一）细菌培养物的生长（二）细菌的收获和裂解(三)质粒DNA的纯化二、质粒DNA的小量制备三、质粒DNA的大量制备四、质粒DNA的纯化

一 基因组酶切和电泳二 转膜三 杂交四 探针标记五 杂交六 洗膜

所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，其目的在于对目的DNA进行进一步分析，或者进行重组改造等。 亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。

1、提取DNA的简易方法:2、从全血中用有机溶剂提取DNA3、从斑痕材料中用有机溶剂提取DNA4、从精斑中分离提取DNA5、用Chelex从全血/血斑中抽提DNA6、用Chelex从精斑中抽提DNA