一种通用高效的复杂载体构建的新方法
A Universal High-throughput Novel Method of Constructing the Vectors
<<遗传 >>2006年02期
陆云华 , 马立新 , 蒋思婧 , LU Yun-Hua , MA Li-Xin , JIANG Si-Jing

文章报道了一种简便、通用、高效的复杂载体构建方法.此法是在PCR引物设计时,在目的片段5′端加上随机设计的接头,利用PCR克隆目的片段,再用T4 DNA聚合酶3′→5′外切酶活性处理PCR克隆目的片段,产生多个首尾相匹配的黏性末端,进行多片段定向连接、转化、重组子鉴定.以7片段拼接的水稻单交换质体定点整合表达载体pRSMGA的构建为例,应用上述方法构建只需做两次连接、转化,且其重组、转化效率高.数10次实验证明:这是一种简便、通用、高效的复杂构建载体的方法,该法至今尚未见报道.

关键词： 复杂载体构建 , 新方法 , T4 , DNA聚合酶 , 水稻